【新闻】北京部分地区仔猪大肠杆菌病血清型调查桂林紫薇

北京部分地区仔猪大肠杆菌病血清型调查

北京部分地区仔猪大肠杆菌病血清型调查

傅彩霞?郑瑞峰?郭峰?靳兴军?李佳?吴惠明?王玉田?原丽

北京市兽医实验诊断所

近年来，由于致病性大肠杆菌血清型的不断变化，致使猪大肠杆菌病的防治越来越困难。为了解目前北京地区仔猪大肠杆菌的血清型情况，为该地区仔猪大肠杆菌病的有效预防和治疗提供技术指导，笔者从北京部分地区发生疑似仔猪黄白痢的猪场，无菌采集死亡仔猪的肝脏等组织样品，对其进行病原菌的分离培养与鉴定，现报道如下。

1材料与方法

1.1调查材料

1.1.1病料

2010年从北京通州、房山、大兴、平谷及顺义地区的10个规模化猪场，采集由腹泻致死的仔猪的肝脏等脏器，共计57份。

1.1.2主要试剂

大肠杆菌“0”抗原单因子血清，购自中国兽医药品监察所；培养基：马丁琼脂、麦康凯琼脂，均购自北京陆桥技术有限责任公司；生化试剂：VITEK革兰阴性菌鉴定卡，购自梅里埃生物有限公司；试验动物：昆明系小鼠，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。

1.2分离鉴定方法

1.2.1细菌分离培养

将采集的肝脏等组织分别接种于马丁琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基上，37℃培养18h～24h，观察菌落形态。挑取可疑菌落涂片、革兰染色、镜检、纯培养。

1.2.2生化试验

参照BioMerieuxVITEK32全自动细菌鉴定及药敏仪鉴定操作说明进行。取纯化的单菌落接于0.45%NaCl基物安培管，用比浊仪制备混浊度相当于1个麦氏单位的菌悬液，接种于VITEK革兰阴性菌鉴定卡（GNI），放入读数器中鉴定，读取结果。

1.2.3致病性试验

将上述生化试验鉴定为大肠杆菌阳性的菌株，分别取纯化的单菌落接种于普通营养肉汤中，37℃培养24h，将每个菌株的营养肉汤培养物分别经腹腔接种小白鼠各2只，每只注射0.2mL，同时用无菌肉汤以同样途径接种2只小白鼠作为对照，观察、记录试验结果。对死亡小白鼠进行剖检，并从肝脏、脾脏取样接种于麦康凯琼脂培养基，37℃培养18h～24h，观察结果。挑取单个菌落用革兰染色法染色、镜检。

1.2.4血清型鉴定

将上述分离鉴定的致病性大肠杆菌制成浓缩菌液，经121℃高压灭菌2h以破坏其K抗原，将制成的抗原与大肠杆菌“0”抗原单因子血清进行玻板凝集试验以鉴定其血清型。1min内出现明显凝集者为阳性反应，同时以生理盐水作对照，观察有无自凝现象。

2鉴定结果

2.1细菌分离培养

57份样品中有36份经培养后生长良好，马丁琼脂培养基上可见灰白色、圆形、光滑、湿润的菌落，在麦康凯琼脂培养基上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐的小菌落，革兰染色为阴性小杆菌，符合大肠杆菌的培养及形态特征。

2.2生化试验

将从病料中分离纯化的菌落经BioMerieuxVITEK32全自动细菌鉴定仪鉴定得到极好鉴定结果，36株菌株均能发酵葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖、乳糖、木糖、鼠李糖、甘露醇、山梨醇，产酸产气；不发酵棉籽糖、肌醇、侧金盏花醇；多数不能发酵蔗糖，少数发酵产酸；鸟氨酸脱羧酶、氧化酶均为阴性；甲基红试验阳性，VP试验阴性，符合大肠杆菌的生化特性。

2.3致病性试验

将生化试验鉴定为大肠杆菌阳性的36株菌株的营养肉汤培养物分别经腹腔接种小白鼠各2只，24h内全部发病死亡，对照组均健活。对死亡小白鼠剖检，并从肝脏、脾脏取样接种于麦康凯琼脂培养基上，37℃培养18h～24h，结果在麦康凯琼脂培养基上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐的小菌落。挑取单个菌落用革兰染色法染色、镜检，可见革兰阴性小杆菌。结果表明，分离纯化的36株大肠杆菌均为致病性大肠杆菌。

2.4血清型鉴定

鉴定出36株致病性大肠杆菌共10种0血清型，其中0l、08和055为分离菌株的优势血清型（见表1）。

表1

3讨论

随着集约化养猪业的发展，由致病性大肠杆菌引起的仔猪腹泻是目前最严重的仔猪传染病之一，也是引起仔猪死亡的重要原因，其造成的经济损失日益严重。如果仔猪黄白痢与其他猪病混合感染，其死亡率更高。据调查，仔猪因腹泻死亡的占仔猪总死亡数的近40%。发病猪场经过敏感药物治疗后，虽然能够在一定程度上降低仔猪的死亡率，但耐过猪大多生长发育迟缓、饲料报酬降低。因此，如何采取有效的措施预防和控制仔猪腹泻，提高仔猪成活率已成为目前养猪业生产的一项重要任务。

在本次调查中，共分离出36株致病性大肠杆菌，鉴定出01、08、026、055、078、0103、0111、0128、0138、014等10个血清型，其中01、08和055为分离菌株的优势血清型，不同区县优势血清型，有的相同，有的不同。国外报道的致初生仔猪腹泻大肠杆菌0血清型有08、09、020、045、064010、0138、0139、0141、0147、0149、0157等。刘书亮等2001年报道，四川省规模化猪场大肠杆菌优势血清型为060、089、0119、014、09、020、0137、010。赵坤等2007年鉴定出豫北地区猪源致病性大肠杆菌0血清型主要是0138、020、02、0139、0l01、060、09、045、063、014、0149、0147和08。本次调查结果与国内外其他地区的报道存在一定的差异。

从各地区报道的血清型来看，各省市流行的猪源致病性大肠杆菌0血清型有较大差别，存在地区性、多样性；并且同一地区的不同猪场流行的主要血清型可能有所不同，同一猪场也可能同时存在多种血清型，且同一猪场在不同时期流行菌株的血清型也不尽相同，这可能与猪场不断从外地引进种猪更新猪群以及菌株的变异有关。因此，定期对猪场的大肠杆菌进行分离鉴定，明确本场目前流行的大肠杆菌血清型，以便有针对性地进行免疫预防和临床诊治。

仔猪大肠杆菌病的发生受多种因素的影响，除了大肠杆菌的病原学特性外，饲养管理、营养状况及环境因素对本病的发生及严重程度有着重要影响。因此，防治本病除了有针对性地免疫接种、使用敏感药物外，还应搞好饲养管理及环境卫生，保证优质饲料和全价营养，使仔猪有充足的营养、舒适的生活环境，尽可能减少应激，提高仔猪的抵抗力。同时，注意制定科学合理的消毒程序、坚持执行行之有效的疫病综合防控技术措施。

长沙华山白癜风专科医院交通指南

成都看强直性脊柱炎预约

苏州治疗性功能障碍医院排名